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层析冷柜厂家讲解气相色谱层析原理及试验条件
点击次数:991 发布时间:2015-09-09 打印本页面 返回

一、气相色谱层析基本原理

    混合样品的气流通过固定相时,根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。

     利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强,能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点,常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期诊断。其结果稳定,重复性好,但不足之处是操作中各因素不易控制,方法不易标化等。

二、气相色谱层析试验条件的选择

1、柱温选择 

   柱温选择对分离度影响很大,常是条件选择的关键。选择的基本原则是:在使难分离的组分有尽可能好的分离高度的前提下,尽可能采取较低温度,但以保留时间适宜及不拖尾为度。

⑴ 高沸点混合物(200℃~400℃),若需在较低的柱温下分析,可采用低固定液配比1%~3%,采用高灵敏检测器,柱温可比沸点低100℃~150℃,在200℃~250℃的柱温下分析。

⑵ 沸点<300℃的样品,可用3%~25%固定液配比。沸点越低,所用配比越高,柱温可比平均沸点低50℃至平均沸点的范围选择。

2、载体选择 

   载体采用低线速时,宜用氮气;高线速时用氢气。柱越长,柱内有较大压力降,宜用氢气。载气采用低线速时为20ml~80ml/min。

3、色谱柱的选择 

   要注意极性及高使用温度,柱温不能超过高使用温度。固定相按极性相似的原则选择。色谱柱的内径大小、长度都能影响分离率。一般而言,内径越小,长度越长,分离效果越好,一般柱长为1m~5m(毛细管柱则20m~100m)。

   层析冷柜厂家提醒填充剂颗粒一般采用40目~60目,60目~80目及80目~100目大小。长柱子宜用粒度大些的,以减少柱压降,短柱子则用粒度细的。

   气相色谱中固定液的含量对分离效率的影响较大。一般采用固定液与载体重量之比为15︰100~25︰100。采用高灵敏度的检测器,由于进样量减少,固定液含量可以降至5︰100以下。这样可以使用较低柱温,从而提高柱效,缩短分析时间。但固定液用量太少会引起吸附。

4、其它条件

⑴ 气化室温度及检测室温度选择:气化温度取决于样品的挥发性、沸点、稳定性以及进样量,一般选择稍高于样品沸点,但不要超过沸点50%以上,以防分解。检测室温度需高于柱温,一般高于柱温30℃左右或与气化室同温。

⑵ 进样量:固定相在配比15%~35%的层析柱时,大进样量液体为10μl,气体为10ml。一般样品量液体4μl,气体为0.5ml~3ml,固体小于1mg。

⑶ 桥电位选择:散热多和选择大的桥电位,在灵敏度相同的情况下,应尽量选择低桥电位,以保护热敏元件。